3522集团新网站

本试剂盒的测定原理如下：Fenton反应是最常见的产生羟自由基的化学反应，H₂O₂的量和Fenton反应产生的OH·-量成正比，当给予电子受体后，用griess试剂显色，形成红色物质，其呈色与OH·-的多少成正比关系。

本试剂盒可以观察机体的抗氧化能力强弱，如测定血清/血浆及体液等，也可以观察植物组织的氧合作用，也可用于体外筛选抗活性氧效能强的食品、营养素、中草药、西药等。

产品信息

组分信息

备注：

1）试剂一为3%H₂O₂标准品贮备液，0.03％标准品应用液的配制：3%H₂O₂标准贮备液∶双蒸水＝1∶99 稀释，现用现配。

2）试剂二为底物贮备液，底物应用液的配制： ①若样本为抑制羟自由基型，即测定管吸光度比对照管吸光度低，则底物应用液的配制：底物贮备液∶双蒸水＝1∶99 稀释，现用现配； ②若样本为产生羟自由基型，即测定管吸光度比对照管吸光度高，则底物应用液的配制：底物贮备液∶双蒸水＝1∶299 稀释，现用现配。

3）试剂三为甲液贮备液和乙液，甲液贮备液用时加双蒸水1∶9 稀释成应用液。

试剂三应用液的配制：甲液应用液与乙液等比例混合，用多少配多少，余下 2℃～8℃保存。

4）试剂四用时加双蒸水稀释至100 mL，制备成应用液，若有结晶，则放置37℃水浴至全部溶解后再稀释。

5）需自备分析纯的冰乙酸（冰醋酸）。

6）显色剂的配制：试剂四应用液∶试剂五∶试剂六∶冰乙酸 ＝8∶3∶3∶2，现用现配。

7）抑制羟自由基型的物质如：血清/浆、各种组织匀浆液、口服液等；产生羟自由基型的物质如：中性白细胞、某些药物、部分植物等。

使用说明

1.仪器试剂准备

含550 nm波长的分光光度计、1 cm光径比色皿（或酶标仪及96孔板）、37℃水浴锅、各种规格移液器、烧杯或试剂瓶、一次性塑料试管或离心管（5 mL或以上规格）、双蒸水、生理盐水（0.9%）、冰乙酸（分析纯，浓度 99.5%以上）、涡旋混匀器、台式低速离心机、蛋白测定试剂、血红蛋白测定试剂。

2.样本前处理

1）血清/浆

直接使用。

2）组织

准确称取待测组织的重量，按重量（g）:体积(mL)= 1:9 的比例加入9倍体积的匀浆介质（推荐0.1 mol/L且pH值为7.0-7.4 的磷酸盐缓冲液或0.9%的生理盐水），冰水浴条件机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清液（10%匀浆上清）待测，组织匀浆上清需测定其蛋白浓度。

3.上清液制备

取样本(或组织匀浆上清)0.15 mL 加试剂一应用液0.45 mL，旋涡混匀，放置15分钟后离心，3500～4000转/分，离心10分钟，上层清亮液体为上清液。组织样本也可以直接用试剂一应用液作匀浆介质匀浆制备上清液，计算时参考组织计算第二条公式。

4.操作表

备注：1）以上配制好的应用液，先在37℃水浴中预温3分种，以下操作在37℃水浴锅中进行。

2）*参考取样：血清/浆样本用生理盐水20倍稀释后取0.2 mL作检测；若您有精确微量移液器，可直接取0.010 mL血清

/浆，再加0.190 mL生理盐水。10%组织匀浆上清，取0.2 mL检测。具体取样浓度需根据预试结果确定。

5.计算公式

1）血清（浆）中抑制羟自由基能力计算

定义：规定每毫升血清（浆）在37℃下反应1分钟，使反应体系中H₂O₂浓度降低1 mmol/L为一个抑制羟自由基能力单位。

抑制羟自由基能力(U/mL) = (1-(A测定-A空白)/(A对照-A空白)) × C标准 × N/V样

其中：C标准：表示标准品浓度，8.824 mmol/L；V样：表示取样量，0.2 mL；N：表示样本测试前稀释倍数。

2）组织中抑制羟自由基能力计算

_{定义：规定每毫克组织蛋白在37℃下反应1分钟，使反应体系中H2O2的浓度降低1 mmol/L为一个抑制羟自由基能力单位。}

抑制羟自由基能力(U/mgprot) = (1-(A测定-A空白)/(A对照-A空白)) × C标准 × N/(V样 × Cpr)

其中：C标准：表示标准品浓度，8.824 mmol/L；V样：表示取样量，0.2 mL；N：表示样本测试前稀释倍数；Cpr：表示组织匀浆蛋白浓度，mgprot/mL（prot指蛋白）

3）溶血液中抑制羟自由基能力计算

定义：规定每毫克血红蛋白在37℃下反应1分钟，使反应体系中H₂O₂的浓度降低1 mmol/L为一个抑制羟自由基能力单位。

抑制羟自由基能力(U/mgHb) = (1-(A测定-A空白)/(A对照-A空白)) × C标准 × N/(V样 × CHb)

其中：C标准：表示标准品浓度，8.824 mmol/L；V样：表示取样量，0.2 mL；N：表示样本测试前稀释倍数；CHb：表示溶血液血红蛋白浓度，mgHb/mL（Hb指血红蛋白）

4）产生羟自由基能力计算

定义：规定每毫升或每毫克物质或每立方厘米内10⁶个细胞在本反应体系中使反应液中H₂O₂的浓度增加1 mmol/L为一个产生羟自由基能力单位。

产生羟自由基能力(U/mL) = ((A测定-A空白)/(A对照-A空白)-1) × C标准 × N/V样

其中。C标准：表示标准品浓度，8.824 mmol/L；V样：表示取样量，0.2 mL；N：表示样本测试前稀释倍数。

2～8℃保存，有效期3个月。