推荐应用
该组分是Hifair®LyoMultiplexOneStepRT-qPCRKit(Cat#11831ES)的酶组分,搭配其buffer组分,可进行以RNA
为模板的多重定量PCR反应。在实验的过程中,逆转录和定量PCR在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的
风险。
该组分利用耐热Hifair®VReverseTranscriptase高效合成第一链cDNA,并利用UNICON®HotStartTaqDNA
Polymerase进行定量扩增,独特的酶组分,搭配可冻干的buffer及保护剂等组分,可用于一步法RT-qPCR冻干反应体系
的配制和产品设计。
产品信息
货号11834ES60/11834ES80/11834ES92
规格100T/1000T/10000T
组分信息
组分编号组分名称11834ES60(100T)11834ES80(1000T)11834ES92(10000T)
11834Hifair®Lyo-EnzymeMix100μL1mL10mL
【注】Hifair®Lyo-EnzymeMix主要包含有耐热Hifair®VReverseTranscriptase和UNICON®HotStartTaqDNAPolymerase。
运输条件
使用方法
1.反应体系(以25uL体系为例)
组分编号组分名称体积(μL)终浓度
11831-A4×Hifair®Lyo-Buffer61x
11834Hifair®Lyo-EnzymeMix1-
11831-C冻干保护剂8-
/PrimerMix(10μM)10.1-1uM
/ProbeMix(10μM)0.50.05-0.5uM
/模板RNA5-
/DEPCH20upto25-
2.参考扩增程序
1)常规扩增程序
循环步骤温度时间循环数
逆转录50℃a10min1
预变性95℃5min1
扩增反应95℃15sec
45
60℃b30seccwww.yeasen.comPage2of22)快速扩增程序
循环步骤温度时间循环数
逆转录50℃a2min1
预变性95℃2sec1
扩增反应95℃1sec
45
60℃b13secc
【注】a.逆转录:42℃或者50℃均可。
b.扩增反应:扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。
c.荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。
3.适用机型
ABI5700,7000,7300,7700,7900HTFast,StepOne™,StepOnePlus™,ABI7500,7500Fast,ViiA™7,QuantStudio
™3and5,QuantStudio™6,7,12kFlex;
StratageneMX3000P™,MX3005P™,MX4000P™;
Bio-RadCFX96™,CFX384™,iCycleriQ™,iQ™5,MyiQ™,MiniOpticon™,Opticon®,Opticon®2,Chromo4™;
EppendorfMastercycler®eprealplex,realplex2s;
QiagenCorbettRotor-Gene®Q,Rotor-Gene®3000,Rotor-Gene®6000;
RocheAppliedScienceLightCycler®480,LightCycler®2.0;Lightcycler®96;
ThermoScientificPikoRealCycler;CepheidSmartCycler®;IlluminaEcoqPCR
注意事项
1.实验过程中请使用RNasefree耗材。
2.为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
/
2~8℃保存,有效期6个月。
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