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Hieff NGS^® OnePot DNA Library Prep Kit for Illumina®是针对Illumina^®高通量测序平台专门开发设计的新一代酶切法建库试剂盒。与传统的建库法相比，本品采用高质量的片段化酶，摆脱了繁琐的超声过程，同时简化了操作流程，将片段化模块与末端修复模块合二为一，极大的降低了建库的时间和成本。本试剂盒具有优秀的文库转化率，可应用于常规动植物基因组、微生物基因组等样本，同时能兼容FFPE DNA样本的建库。经测序验证，不同GC含量的样本，均可获得优异的测序结果，文库覆盖度高，均一性好，偏好性低，使建库变得更加简单高效。

• 适用500 pg-1 μg的基因组DNA、全长cDNA等样本。
• 高质量片段化酶，可随机切割双链DNA，酶切片段无偏好性。
• 片段化、末端修复/加A一步完成。
• 强扩增效率的高保真酶，显著提高文库质量及产量。
• 适用于FFPE DNA样本。
• 严格的批次性能与稳定性质控。

OnePot DNA 建库试剂盒酶切 800 ng 小牛胸腺 gDNA 样本（不同酶切时间片段化效果检测）

使用本试剂盒进行 human gDNA 样本建库，文库进行电泳检测（Input DNA 为 500 ng，酶切 20 min，扩增 5 cycles）

-25~-15℃保存。

Q：OnePot 建库试剂盒具体针对哪种样本建库效果比较好？

A：OnePot DNA 建库试剂盒针对基因组 DNA 和 cDNA 均可获得高产高质的文库。

Q：OnePot DNA 建库试剂盒是一管完成建库，具体哪几步是一起完成？

A：OnePot DNA 建库试剂盒将片段化，末端修复/A 尾添加，接头连接三步一管完成。整个流程仅需2.5-3h，简单高效。

Q：片段化模块酶是内切酶还是外切酶？单酶还是混合酶？初始投入量范围是多少呢？

A：内切酶，单酶。初始投入量范围 500pg-100 ng，经过 42℃-15min, 可将 DNA 酶切为 150-550 bp 的长度。

Q：OnePot 建库试剂盒与 Tn5 和 MaxUP II 有什么不同，如何进行推广？

A：OnePot 优势在于引入高质量片段化酶，摆脱复杂的片段化过程，具有稳定的片段化效果。同时搭配强扩增效率的高保真酶，极大提升文库转化效率与扩增效率。且针对不同GC 含量的样本，均可获得优异的测序结果，文库覆盖高，均一性好，偏好性低，使建库变得更加简单；Tn5 优势在于快速， 缺点在于 input DNA 范围太小，应用范围狭窄，且片段化过程中存在碱基偏好性；MaxUpⅡ试剂盒胜在全能。如果针对 cfDNA 等特殊样本建库，只能推荐 MaxUpⅡ。如果是要基因组建库，肯定更愿意用 OnePot 建库，因为可以省去仪器、打断管等额外成本。如果目的是想快速建库，推荐Tn5。

Q：碱基质量分析图如何分析？

A：知识科普：碱基分布图是对每个位置上的 A,C,G,T 的含量进行统计。理论上来说 DNA 双链中碱基含量是 A=T，G=C，A+C=G+T，如果是一个比较完美的碱基含量分布图，应该是所有位点上的每条线应该平等且接近的。但是不同物种的 GC 含量有所差异，所以通常 A/T 与 G/C 碱基含量曲线通常并不是很接近。如果当部分位置上的碱基比例出现 bias 时，各个碱基含量也会出现差异。

Q：测序数据如何分析

A：概念解释： Reads：二代测序仪器产生的短序列片段。 Mapped reads：匹配到基因组的 reads 数与total reads 数的比例。 Coverage：基因组覆盖度：测序获得的序列占整个基因组的比例。由于基因组中的高 GC、重复序列等复杂结构的存在，测序最终拼接组装获得的序列往往无法覆盖有所的区域，这部分没有获得的区域就称为 Gap。例如一个细菌基因组测序，覆盖度是 99.64%，那么还有 0.36%的序列区域是没有通过测序获得的。 Depth：测序深度是指测序得到的总碱基数与待测基因组大小的比值。假设一个基因大小为 1M，测序深度为 10X，那么获得的总数据量为 10M。

Q：Q20/Q30是什么

A：二代测序中，每测一个碱基会给出一个相应的质量值，这个质量值是衡量测序准确度的。行业中 Q20 与 Q30 则表示质量值≧20 或 30 的碱基所占百分比。质量值（Q）越高代表碱基被测错的概率（P）越小，其计算公式为 Q= -10lgP，所以 P=10^（Q/(-10)）

即：Q20 对应的碱基被测错的概率 P=10^（20/(-10)）=0.01=1% Q30 对应的碱基被测错的概率 P=10^（30/(-10)）=0.001=0.1%

[1] Zhang S, Pei Z, Lei C, et al. Detection of cryptic balanced chromosomal rearrangements using high-resolution optical genome mapping [published online ahead of print, 2022 Jun 16]. J Med Genet. 2022;jmedgenet-2022-108553. doi:10.1136/jmedgenet-2022-108553(IF:6.318)

[2] Ren J, Zhang R, Pan C, et al. Prevalence and genotype-phenotype correlations of GBA-related Parkinson disease in a large Chinese cohort. Eur J Neurol. 2022;29(4):1017-1024. doi:10.1111/ene.15230(IF:6.089)

[3] Zhang RF, Man YX, Bai YY, et al. Molecular characterization of Clostridioides difficile ribotype 027 in a major Chinese hospital. J Microbiol Immunol Infect. 2021;54(6):1179-1183. doi:10.1016/j.jmii.2021.01.003(IF:4.399)