新品|Cas9蛋白，实现精准基因敲除
15636
2023-05-08
01
目前，在基因干扰的方法中，应用最广泛的当属RNAi技术（siRNA or shRNA）了。然而，其较高的脱靶效应和较低的基因下调能力限制了它的应用和发展。因此，CRISPR/Cas9技术则表现出它独特的优势。
CRISPR/Cas9是最新一代基因编辑技术，其工作原理为首先根据靶基因合成sgRNA序列，sgRNA可以和Cas9蛋白结合，因为靶基因和sgRNA序列互补结合，sgRNA可携带着Cas9蛋白精确找到靶基因，并对其进行剪切，产生DNA双链断裂（DSB）。断裂通过非同源端部连接（NHEJ）或同源定向修复（HDR）激活修复。在没有模板的情况下，NHEJ被激活，导致目标基因被删除或缺失，从而破坏目标位点，可用于基因的敲除。在存在与目标位点同源的供体模板的情况下，HDR途径起作用，允许进行精确的修改基因序列，常用于基因的突变修复和基因敲入形成1。
图1.CRISPR/Cas9常见应用
图2.CRISPR/Cas9剪切基因示意图2
表1.RNAi技术和CRISPR/Cas9技术对比表
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RNAi |
CRISPR/Cas9 |
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作用效果 |
可逆转敲低，持续时间短 |
不可逆转敲低，持续时间长，可稳定传代 |
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脱靶效应 |
极高 |
低 |
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目标基因 |
mRNA编码基因 |
作用广泛，编码及非编码基因均可 |
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抑制基因效率 |
低 |
高 |
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实验难易程度 |
容易 |
较容易 |
02
3522集团新网站生物提供全新一代的多种类型Cas9蛋白，只需要设计目的靶标的sgRNA,将sgRNA和Cas9蛋白通过专用蛋白转染试剂或者电转法导入细胞内部，便可实现体内外精准基因敲除，敲除效率极高，且脱靶效应低。
图3.操作示意图
表2.Cas9产品选择推荐表
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产品货号 |
产品名称 |
种属 |
标签 |
荧光定位 |
双端核定位 |
特点 |
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11362 |
野生化脓性链球菌 |
His |
无 |
是 |
安全性好 |
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11363 |
野生化脓性链球菌 |
无 |
无 |
是 |
编辑效率最高 |
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11364 |
野生化脓性链球菌 |
His |
EGFP |
否 |
便于观察 |
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11366 |
Ultra NLS-Cas9-Research |
野生化脓性链球菌 |
无 |
无 |
否 |
安全性最好 |
产品性能展示
图4.产品货号为11362，在20 μL的反应体系，含有线性化质粒、gRNA 和Cas9的1×Cas9核酸酶反应缓冲液中在37°C下反应1小时，在琼脂糖凝胶电泳测定结果显示，线性化质粒的消化效率为97.37%，远高于90%。
图5.产品货号为11363，在20 μL的反应体系，含有线性化质粒、gRNA 和Cas9的1×Cas9核酸酶反应缓冲液中在37°C下反应1小时，在琼脂糖凝胶电泳测定结果显示，线性化质粒的消化效率为98.28%，远高于90%。
表3.新品Cas9蛋白质控标准
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
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11362ES |
50 μg / 100 μg |
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11363ES |
50 μg /100 μg / 500 μg |
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11364ES |
50 μg / 100 μg |
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NLS-Cas9 Nuclease |
11366ES |
50 μg / 100 μg / 500 μg |
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产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
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11355ES |
25 T / 50 T / 100 T |
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11352ES |
100 pmol / 500 pmol |
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11353ES |
100 pmol / 500 pmol |
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11354ES |
100 pmol / 500 pmol |
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99401ES |
96T |
1. Ma Y, Zhang L, Huang X. Genome modification by CRISPR/Cas9. FEBS J. 2014 Dec;281(23):5186-93. doi: 10.1111/febs.13110. Epub 2014 Nov 7. PMID: 25315507.
2. Jiang F, Doudna JA. CRISPR-Cas9 Structures and Mechanisms. Annu Rev Biophys. 2017 May 22;46:505-529. doi: 10.1146/annurev-biophys-062215-010822. Epub 2017 Mar 30. PMID: 28375731.
