本试剂盒包含重组小鼠M-CSF和小鼠RANKL，用于诱导小鼠来源的前体细胞（如RAW264.7细胞系或原代骨髓单核细胞）分化为具有成熟骨吸收功能的破骨细胞。

     M-CSF(巨噬细胞集落刺激因子)支持前体细胞的存活、增殖，并使其具备向破骨细胞分化的潜能，是分化的“许可”信号。RANKL（核因子κB受体活化因子配体）是驱动破骨细胞终末分化与融合的决定性信号，激活下游NFATc1等关键转录程序。

    本试剂盒中的M-CSF和RANKL，具有高活性、高纯度、低内毒素的特点。本试剂盒能高效驱动前体细胞分化为破骨细胞，可获得大量多核、TRAP强阳性的成熟破骨细胞。

产品组分

产品包含

复溶方法

Raw264.7诱导破骨细胞实验方案

1.破骨细胞前体细胞接种

1.1 将生长状态良好的Raw 264.7细胞用含10%胎牛血清（FBS）的α-MEM完全培养基重悬，并进行细胞计数。

1.2 将细胞以2.5 × 10³ cells/mL的密度，接种于已预先放置无菌盖玻片的24孔细胞培养板中，每孔加入1mL细胞悬液。

1.3 将培养板置于37°C、5% CO₂的细胞培养箱中静置培养18小时，使细胞充分贴壁。

2.破骨细胞诱导分化

2.1 细胞贴壁后（接种后约18小时），吸弃孔内旧培养基。

2.2更换为新鲜的破骨细胞诱导完全培养基。诱导培养基为含10% FBS的α-MEM培养基，并补充50 ng/mL重组小鼠M-CSF 蛋白及 100 ng/mL重组小鼠RANK L蛋白。

2.3此后，每3天更换一次诱导培养基。更换时，轻柔吸弃旧液，并加入等体积的、含有相同浓度M-CSF蛋白与RANK L蛋白的新鲜诱导培养基。

3. 细胞形态学观察与鉴定

3.1形态观察：自诱导开始，定期在倒置显微镜下观察细胞形态变化。通常，在RANK L诱导 4天 后，可观察到典型的多核破骨细胞样结构。

3.2 TRAP染色验证：RANK L诱导 5天 后，进行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色以特异性鉴定破骨细胞。严格按照TRAP染色试剂盒的说明书步骤进行染色操作。

染色完成后，在光学显微镜下观察。成熟的破骨细胞胞浆呈红色或红紫色。

小鼠骨髓细胞(BMMs)诱导破骨细胞实验方案

1.骨髓细胞接种

1.1 将现取的小鼠骨髓细胞裂红后，用含10%胎牛血清（FBS）的α-MEM完全培养基重悬，并进行细胞计数。

1.2 将细胞密度稀释至2 × 10^5 cells/mL，并加入M-CSF至终浓度为30ng/mL，细胞接种于已预先放置无菌盖玻片的24孔细胞培养板中，每孔加入1mL细胞悬液。

1.3 将培养板置于37°C、5% CO₂的细胞培养箱中静置培养5天，每2天换一次液（含30ng/mL M-CSF） 。

2.破骨细胞诱导分化

2.1 吸弃孔内旧培养基。阴性孔中加入含30ng/mL M-CSF的完全培养基，阳性孔中加入含 30 ng/mL M-CSF和50 ng/mL RANK L蛋白的完全培养基。

2.2此后，每2天更换一次培养基。阴性孔中加入含30 ng/mL M-CSF的完全培养基，阳性孔中加入含30 ng/mL M-CSF和50 ng/mL RANK L蛋白的完全培养基。

3. 细胞形态学观察与鉴定

3.1 形态观察：自诱导开始，定期在倒置显微镜下观察细胞形态变化。通常，在RANK L诱导 4天 后，可观察到破骨细胞样结构。

3.2 TRAP染色验证：RANK L诱导 5-7天 后，进行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色以特异性鉴定破骨细胞。严格按照TRAP染色试剂盒的说明书步骤进行染色操作。

染色完成后，在光学显微镜下观察。成熟的破骨细胞胞浆呈红色或红紫色。

高活性、高纯度、高稳定性、低内毒素

-25 ~ -15℃保存，收到货之后有效期1年。
复溶后，无菌条件下，2~8℃保存，7天有效期。复溶后， 无菌条件下，-85 ~ -65℃保存，3个月有效期。